最近在使用工程化B細胞或腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)的免疫療法中，B細胞的擴增引起研究人員越來越多的關注。目前用于B細胞擴增的方法效率低、時間長，并且會導致B細胞數(shù)量不足和T細胞持續(xù)衰竭。Adipogen推出的B-Xpander™蛋白通過模擬B細胞上CD40L和CD40分子之間的自然相互作用，改進了目前B細胞刺激方案。

B-Xpander™是一種有效的增強型多聚體人CD40L細胞因子，用于B細胞活化、B細胞擴增和細胞治療應用。Adipogen使用專-利方法和經(jīng)鑒定并認證的CHO細胞系進行生產(chǎn)，可提供類似GMP形式的具有超高活性的多聚體人CD40L蛋白。

B-Xpander™的特點：

• 使用經(jīng)過鑒定和認證的可用于GMP級別生產(chǎn)的CHO細胞系進行生產(chǎn)

• 通過ELISA和基于細胞的檢測方法測試的高生物活性

• 通過SEC驗證具有高純度和均一性

• 低內(nèi)毒素水平

• 批次間一致性好

• 無動物成分來源

• 生產(chǎn)過程不使用交聯(lián)劑

B-Xpander™具有多聚體人CD40L蛋白的結構，其中人CD40L胞外結構域(aa 116-261)通過ACRP30的膠原結構域人工連接。來自小鼠脂聯(lián)素的ACRP30無頭多聚化結構域序列允許B-Xpander™的多聚化(10-12 x三聚體)。B-Xpander™非常有效地模擬了人CD40L在體內(nèi)的天然膜輔助聚集，是in vitro和 ex vivo應用的理想選擇。

圖1.B-Xpander™或多聚體人CD40L的結構

應用實例

B 細胞擴增（增殖）

B-Xpander™與其他級別的多聚人CD40L一樣可以有效提升人原代CD19+ B細胞的增殖。與市場上大多數(shù)重組CD40L蛋白不同，Adipogen的B-Xpander™和多聚體CD40L蛋白不需要增強子(抗體)就能進行多聚體化和激活。

圖2. B細胞增殖檢測

通過人原代CD19+ B細胞的增殖來測定B-Xpander™和2種不同科研級別多聚體hCD40L的活性。細胞(5 x 10^4/孔)在RPMI培養(yǎng)基、谷氨酰胺、10%胎牛血清、人IL-4(10ng/ml)、人IL-21(10ng/ml)和不同濃度的B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (Animal-Free) (#AG-40B-0010AF)，CD40L (human) (multimeric) (rec.) (CSG; Certified Serum Grade) (#AG-40B-0010CSG), CD40L (human) (multimeric) (rec.) (#AG-40B-0010)，或對照蛋白培養(yǎng)條件下。4天后使用PMS/MTS (ellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega)對細胞增殖進行定量。4天后細胞擴增10倍，達到5×10^5/孔。

B 細胞激活

B-Xpander™也非常適用于B細胞的激活：B-Xpander的多聚體結構模擬了膜結合人CD40L的生物活性，是一種高效的B細胞激活因子。B-Xpander是激活人類CD40的最-有效融合蛋白替代物。使用B-Xpander，不需要增強子(抗體) 就能實現(xiàn)多聚化和超高活性。

圖3.B-Xpander™ (Prod. No. AG-40B-0010AF)誘導B細胞活化。

將PBL細胞在96孔板(2x10^5 cells/孔，含10%FCS的100μl RPMI細胞培養(yǎng)基)中于37°C下培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)液中含有指-定濃度的B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (Animal Free) (#AG-40B-0010AF), CD40L (human) (multimeric) (rec.) (#AG-40B-0010)或三聚體人CD40L作為對照。用PBS洗滌細胞，并分別用2μl CD86-PE和CD19-FITC（在50μl FACS緩沖液(PBS，5%FBS，0.02%疊氮化物)中）在4度避光條件下染色20分鐘。用FACS緩沖液洗滌兩次后，通過流式細胞儀分析樣品。

B細胞擴增在過繼性細胞治療中的作用

在ACT（Adoptive Cell Therapy，過繼細胞療法）過程中，從患者的血液或腫瘤組織中分離出T細胞，體外擴增和活化，然后重新輸回患者體內(nèi)，以靶向清除癌細胞。T細胞可以被改造成表達識別腫瘤特異性抗原的嵌合抗原受體(CARs)或T細胞受體(TCRs )，或者它們可以被擴增以富集具有天然腫瘤特異性反應性的腫瘤浸潤性淋巴細胞(TILs, tumor-infiltrating lymphocytes)。然后，患者的腫瘤細胞可以與擴大的TILs相互作用，以篩選可以殺死腫瘤細胞的效應TILs。

最近，研究者發(fā)現(xiàn)B細胞在ACT中是一個新的關鍵角色。TILs浸潤的B細胞越多，TIL的擴增和激活越好。用B-Xpander™刺激和擴增并裝載腫瘤特異性抗原的B細胞可提高腫瘤特異性TILs的數(shù)量。

圖4.TILs擴增的ACT工作流程

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