免疫組化試劑盒檢測的原理是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗。計算方法是以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
免疫組化試劑盒在沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
1.樣品稀釋：酶聯(lián)免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋，不可避免會產生很強的非特異性反應，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現(xiàn)出來。樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如產品應取10u1樣品進行稀釋，個別用戶取5u1甚至1u1樣品進行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準確，檢測結果出現(xiàn)問題。
2.試劑盒平衡：試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒打開盒蓋置37℃溫箱20分鐘。稀釋前、后的樣品需要充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。
3.加樣：盡量操作規(guī)范，將液體垂直懸空快速加入到微孔板中，避免加到孔避上。加完試劑后用手適當振蕩或在桌面適當作圓周運動，使孔內試劑充分混勻，蓋好蓋板膜。
4.洗板：洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置10-15s，甩去板孔中洗液后，一定要用力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗結果。
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